Reconnaissance cellulaire de ligands d'intégrines greffés sur matériaux polymères : application à la déleucocytation de produits sanguins

La présence de leucocytes dans les dérivés sanguins à transfuser a été soulignée et rendue responsable de différentes complications graves chez les patients receveurs,et notamment chez certaines catégories de patients plus sensibles tels les immunodéprimés, les nouveau-nés, les candidats aux greffes, et les personnes transfusées à répétition. Le but de ce projet est l'aménagement de membranes de filtration du sang permettant une rétention cellulaire sélective par greffage covalent de ligands spécifiquement reconnus par les intégrines α4β1, α4β7, et β2 exprimées chez les leucocytes Nous avons envisagé l'amélioration des propriétés filtrantes de deux membranes commerciales, de PVDF et de PBT, en y fixant de manière covalente des ligands d'intégrines de leucocytes. Nous avons réalisé la synthèse de divers dérivés des tripeptides LDV et LLG ainsi que d'un composé peptidomimétique. Ces molécules ont été greffées de manière covalente aux membranes, par le biais de bras d'espacement de type polyéthylène glycol, permettant d'exposer les signaux biologiques de façon optimale vis-à-vis de la reconnaissance cellulaire. Nous avons caractérisé les membranes de PVDF et de PBT par SEM (Scanning electron microscopy : étude structurale, compatibilité des solvants, contrôle d'intégrité après traitements), par XPS (X-Ray photoelectron spectroscopy : étude sur les membranes natives, greffages de sondes chlorées ou fluorées) ainsi que par LSC (Liquid scintillation counting : mesures de réactivité de surface vis-à-vis de la lysine tritiée,tests d'activation, mise au point des modes opératoires).Les fonctions accessibles au greffage sont de type acides carboxyliques et alcools pour les membranes de PBT et de type alcools pour celles de PVDF. Diverses méthodes de greffage ont été testées sur ces deux matériaux. La méthode retenue pour le PBT consiste en l'utilisation d'un clip moléculaire muni d'une fonction azoture et d'un ester activé sous forme de N-hydroxysuccinimide, mis au point au laboratoire, greffé par activation photochimique. D'autre part, c'est une activation des fonctions alcools présentes sur le PVDF par le fluorure de cyanuryle qui a retenu notre attention. Ces deux méthodes ont été appliquées à la fixation des ligands d'intérêt synthétisés par nos soins. Les membranes dérivatisées ont finalement été analysées en XPS pour s'assurer de la présence des ligands et utilisées dans des tests de filtration de buffy coat. La qualité de la filtration obtenue a pu être évaluée en cytométrie de flux. Les résultats obtenus sont intéressants puisqu'une nette amélioration de la qualité de la rétention leucocytaire a pu être observée (facteur 100).