Rôle de FOXO1 dans le lymphome non-hodgkinien : Identification des protéines partenaires par spectrométrie de masse

La protéine FOXO1 fait partie d’une famille de facteurs de transcription appelée Forkhead Box de sous-groupe O (FOXO). L’activité de FOXO1 est principalement régulée par Akt : sa phosphorylation entraîne son inactivation via sa translocation dans le cytoplasme. Dans les lymphocytes B, FOXO1 joue un rôle primordial lors de leur activation après rencontre avec leur antigène, en contrôlant les mécanismes du centre germinatif. Plus précisément, il favorise la prolifération clonale et l’hypermutation somatique du gène de l’immunoglobuline. Des mutations ponctuelles de FOXO1 ont été identifiées chez des patients atteints de lymphomes B non-hodgkiniens (environ 10%). Leurs rôles dans le développement de cette maladie restent encore méconnus. Afin d’élucider le(s) rôle(s) de FOXO1 et d’explorer des mécanismes impliqués dans le lymphome B, nous nous sommes intéressés aux protéines partenaires de FOXO1. Nous avons mis au point un protocole d’immunoprécipitation suivi de l’analyse des complexes protéiques en spectrométrie de masse. Nous avons travaillé avec différents modèles, qui possèdent soit un FOXO1 wild-type, soit portant la mutation M1 ou N216K. La mutation M1 se trouve être une mutation relativement récurrente. FOXO1 M1 est séquestré dans le noyau en échappant à la régulation par Akt, et est dite activatrice. Le mutant N216K présente une localisation cytoplasmique étonnante. Le but de ce projet est de comprendre les mécanismes d’action des mutations de FOXO1 dans le lymphome non-hodgkinien en comparant les profils de protéines associées à FOXO1. Ensuite, nous nous sommes particulièrement focalisés sur le mécanisme de régulation de la translocation cytoplasmique de la mutation N216K, encore non décrite dans la littérature. Premièrement, nous avons muté les acides aminés à proximité de N216 de FOXO1 (de 213 à 219) et avons analysé leur localisation par western-blot et leur activité par luciférase. Ces expériences nous ont appris que les acides aminés 216, 217 et 218 sont tous les trois impliqués dans la régulation de la localisation cytoplasmique de FOXO1, nous permettant de dresser de nouvelles hypothèses à ce sujet. Deuxièmement, nous avons identifié les protéines partenaires de FOXO1 par spectrométrie de masse. Dans un premier temps, par simple purification, nous avons comparé les interactants de FOXO1 WT et M1 en précipitant FOXO1 endogène de deux lignées cellulaires de lymphomes B. Dans un deuxième temps, par double purification via le système TAP-TAG, nous avons analysé les partenaires de FOXO1 WT et N216K, après création de lignées stables de lymphomes B exprimant FOXO1 WT et FOXO1 N216K. L’ensemble des résultats a permis d’élargir les possibilités de fonctions spécifiques à FOXO1 dans le lymphome. Par la suite, il faudra valider l’interaction de FOXO1 avec les candidats intéressants et investiguer le rôle d’une collaboration entre FOXO1 et ses partenaires dans le développement du lymphome non-hodgkinien.